Праэнкефалін у спіннамазгавой вадкасці як біямаркер прэматорнай хваробы Хантынгтана

Артыкул мае назву «Праэнкефалін спіннамазгавой вадкасці прадказвае стрыятальную атрафію за дзесяцігоддзі да клінічнай маторнай дыягностыкі пры хваробе Хантынгтана». Мена, [00:01:00] віншую з публікацыяй артыкула і вялікі дзякуй за тое, што далучыліся да нас сёння.

Доктар Мена Фараг: Эдуарда, дзякуй за запрашэнне і за тое, што мяне прынялі ў падкаст Таварыства рухальных расстройстваў.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Такім чынам, перш чым мы паглыбімся ў ваш артыкул, што такое проэнкефалін і як ён звязаны з патафізіялогіяй хваробы Хантынгтана?

Доктар Мена Фараг: Такім чынам, мы ведаем, што клінічна хвароба Хантынгтана праяўляецца як сукупнасць прагрэсавальных рухальных парушэнняў, кагнітыўнага зніжэння і нейрапсіхіятрычных расстройстваў з пачаткам узросту, звычайна ў сярэдзіне дарослага ўзросту. Нягледзячы на ​​значную міжіндывідуальную варыябельнасць і на неўрапаталагічным узроўні, хвароба Хантынгтана вызначаецца ранняй рэгіянальнай селектыўнай нейрадэгенерацыяй.

Нейроны стрыатума і сярэдніх калючых нейронаў прадстаўляюць найбольш уразлівую папуляцыю нейронаў. Атрафія стрыатума з'яўляецца адной з самых ранніх і найбольш паслядоўных адкрыццяў пры візуалізацыі і пасмяротных высновах пры гэтым захворванні. І ў гэтым выпадку нейроны стрыатума непрамога шляху асабліва ўспрымальныя. Гэтыя нейроны [00:02:00] характарызуюцца не толькі сваім ГАМКергічным фенатыпам, але і экспрэсіяй нейрапептыдаў, атрыманых з энкефаліну.

Такім чынам, проэнкефалін, або PENK, з'яўляецца папярэднікам энкефалінаў і высока ўзбагачаны ўскосным шляху, які праецыруецца да бледнага шара стрыатума, і дадзеныя транскрыптаў як жывёл, так і людзей паказваюць, што экспрэсія PENK сканцэнтравана ў базальных гангліях, што падтрымлівае біялагічную спецыфічнасць да стрыятальных ланцугоў. А да гэтай працы пасмяротныя даследаванні і аналіз Хантынгтана паказалі зніжэнне ўтрымання энкефаліну ў нуклідах базальных гангліяў, што сведчыць аб магчымасці ранняй дысфункцыянальнай страты нейронаў, якія экспрэсуюць энкефалін. І гэтыя высновы сапраўды даюць моцнае механістычнае абгрунтаванне для PENK як кандыдата на біямаркер уразлівасці стрыатума пры хваробе Х'юстана.

За апошнія пяць гадоў былі праведзены папярочныя даследаванні, якія паказалі, што PENK можна надзейна колькасна вызначыць у спіннамазгавой вадкасці, а менавіта ў спіннамазгавой вадкасці. [00:03:00] Канцэнтрацыі PENK паслядоўна зніжаюцца пры хваробе Хантынгтана, і гэта зніжэнне фактычна было паўторана ў незалежных кагортах, што пацвярджае яго ролю як кандыдата на біямаркер стадыі захворвання.

І, што незвычайна ў неўралогіі і ў параўнанні з іншымі нейрадэгенератыўнымі захворваннямі, узровень PENK у спіннамазгавой вадкасці быў ніжэйшым у людзей з хваробай Хантынгтана не толькі ў параўнанні з кантрольнай групай, але і з іншымі нейрадэгенератыўнымі захворваннямі, у тым ліку хваробай Паркінсана, хваробай Альцгеймера і БАС. І важна адзначыць, што гэтыя ніжэйшыя канцэнтрацыі PENK карэлююць з цяжарам захворвання і рухавікамі змен, што таксама пацвярджае яго біялагічную значнасць для паталогіі хваробы Хантынгтана.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Такім чынам, здаецца, у вас ёсць доказы таго, што гучыць як ідэальны біямаркер. Ён спецыфічны, звязаны з біялогіяй. Ён змяняецца з цягам часу. Ён карэлюе з клінічнымі зменамі, і менавіта гэта ваша даследаванне спрабуе паказаць, ці з'яўляецца гэты біямаркер больш спецыфічным.

І ў вашым даследаванні вы вылучаеце гіпотэзу, што ён можа [00:04:00] быць больш спецыфічным, чым іншыя маркеры нейрадэгенерацыі, якія выкарыстоўваліся раней у людзей з хваробай Хантынгтана або ў больш агульным выпадку пры нейрадэгенерацыі, такія як лёгкі ланцуг нейрафіламентаў. А таксама вы параўноўваеце гэта з прагрэсаваннем на МРТ, а таксама з прагрэсаваннем на біялагічнай стадыі хваробы Хантынгтана.

Ці можаце вы расказаць нам крыху больш пра гіпотэзу і вынікі гэтага даследавання?

Доктар Мена Фараг: Такім чынам, нягледзячы на ​​тое, што даследаванні, праведзеныя да гэтага часу, паказвалі на вялікія перспектыўнасці, існавалі некаторыя важныя прабелы. Папярэднія даследаванні былі ў асноўным папярочнымі. У іх удзельнічалі адносна невялікія або пераважна клінічна выяўленыя кагорты, і яны насамрэч не вывучалі, ці змяняецца ПЭНК у спіннамазгавой вадкасці (СМР) падоўжна, ці звязана гэта з рэгіянальнай атрафіяй мозгу. І, у прыватнасці, не была праверана фактычная нейраанатамічная спецыфічнасць ПЭНК у СМР як маркера стрыяральнай нейрадэгенерацыі. Такім чынам, насамрэч мэтай даследавання было ацаніць праэнкефалін у СМР як біялагічна абгрунтаваны біямаркер ранняй [00:05:00] хваробы ХБ, засяродзіўшыся спецыяльна на кагорце маладых дарослых з далёка не пачаткам хваробы ХБ.

І таму мы імкнемся даследаваць як папярочныя, так і падоўжныя сувязі паміж базавымі канцэнтрацыямі PENK у спіннамазгавой вадкасці і рэгіянальна-спецыфічнай нейрадэгенерацыяй з дапамогай структурнай МРТ. І таму наша асноўная гіпотэза заключалася ў тым, што больш нізкія базавыя канцэнтрацыі PENK у спіннамазгавой вадкасці будуць звязаны з наступнай атрафіяй мозгу пераважна ў стрыатуме.

І мы таксама, як вы сказалі, імкнуліся параўнаць рэгіянальныя заканамернасці структурных асацыяцый, звязаных з PENK, з тымі, што назіраліся для іншых біяфлюідных біямаркераў, якія паказвалі адрозненні, звязаныя з захворваннямі, галоўным чынам святло нейрафіламентаў, якое, як мы ведаем, адлюстроўвае больш глабальнае і генералізаванае нейрааксональнае пашкоджанне.

І мы гаворым пра стадыраванне і патэнцыял гэтай працы для стратыфікацыі стадый і дызайну клінічных выпрабаванняў. І таму гэта можа быць добрым момантам для прадстаўлення Інтэграванай сістэмы стадыравання HD або HD ISS [00:06:00], якая з'яўляецца ключавой структурай, што ляжыць у аснове актуальнасці гэтай працы.

Традыцыйна стадыяванне пры хваробе ХБ грунтавалася на клінічных фенатыпах, таму шырока адрознівалі перадманіфестную і маніфестную хваробу. І хоць гэта клінічна карысна, такі падыход не ўлічвае асноўную біялагічную прагрэсію, якая папярэднічае развіццю сімптомаў. Таму была распрацавана міжведамасная шкала хваробы ХБ, каб вырашыць гэтую праблему, забяспечыўшы больш уніфікаваную базу на доказах, якая ахоплівае натуральную гісторыю хваробы ХБ па ўсім кантынууме. Такім чынам, у міжведамаснай шкале хваробы ХБ вылучаюць чатыры стадыі, і праца ў гэтай працы ў асноўным уключае ўдзельнікаў даследавання маладых дарослых з ХБ, якія знаходзяцца на нулявой стадыі, у тым ліку ўдзельнікаў, якія былі носьбітамі экспансіі генаў з поўнай пенетрантнасцю, але без якіх-небудзь выяўленых біялагічных змен.

Першая стадыя фактычна вызначаецца біямаркернымі доказамі паталогіі і класіфікуецца спецыяльна з дапамогай аб'ёмных МРТ-паказчыкаў, якія называюцца атрафіяй IAM [00:07:00], другая стадыя фіксуе з'яўленне нязначных рухальных і клінічных прыкмет, кагнітыўных прыкмет, а трэцяя стадыя адлюстроўвае функцыянальнае зніжэнне. І ў многіх клінічных выпрабаваннях на дадзены момант удзельнічаюць удзельнікі, якія знаходзяцца на другой і трэцяй стадыях HD ISS.

І таму ранняя дыягностыка захворвання. І таму вялікая частка гэтай працы і вялікая частка працы па даследаванні ХБ у маладых дарослых, галоўная мэтай з'яўляецца адсочванне самых ранніх біялагічных змен у ранніх кагортах, якія патэнцыйна можна было б выкарыстоўваць для распрацоўкі прафілактычных даследаванняў.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Гэта выдатны рэзюмэ, і вельмі цікава, што ваша даследаванне сканцэнтравана на гэтых вельмі цікавых кагортах на самых ранніх стадыях захворвання. Ці можаце вы расказаць нам крыху больш пра кагорты даследавання, а таксама пра метады, якія вы выкарыстоўвалі ў гэтым даследаванні?

Доктар Мена Фараг: Вядома. Даследаванне маладых дарослых з хваробай Хантынгтана (HD Young Adult Study) — гэта падоўжная назіральная кагорта маладых дарослых, якія з'яўляюцца носьбітамі экспансіі гена хваробы Хантынгтана [00:08:00] і ў сярэднім знаходзяцца прыкладна ў 20-гадовым стагоддзі ад прагназаванага клінічнага маторнага дыягназу. Іх супастаўлялі з непашкоджанымі кантрольнымі групамі, вельмі блізкімі па ўзросце, полу і ўзроўню адукацыі.

Такім чынам, даследаванне было задумана і ўзначалена прафесарам Сарай Табрызі, і яно пачалося ў 2017 годзе. Да гэтага часу яно ахоплівае два часавыя пункты. Нядаўна мы завяршылі трэці часавы пункт. Інтэрвал паміж першым і другім візітамі склаў прыблізна чатыры з паловай гады.

Такім чынам, кагорта сапраўды глыбока фенатыпаваная. Яна ўключала мультымадальныя ацэнкі, у тым ліку біявадкасці, аналіз крыві і спіннамазгавой вадкасці. Такім чынам, з дапамогай трох тэсламетраў, клінічнага абследавання МРТ, кагнітыўнага тэставання і нейрапсіхіятрычнага прафілявання. За чатыры з паловай гады ў нас было 103 удзельнікі, якія вярнуліся для наступнага назірання, і мы таксама набралі 23 новых удзельнікаў. Што тычыцца метадаў, асабліва ў гэтай працы [00:09:00], то гэта пераважна аналіз на аснове выяваў біявадкасцей. Такім чынам, для аналізу структуры мозгу мы выкарыстоўвалі морфную геаметрыю на аснове вокселяў усяго мозгу, вядомую як VBM.

І гэта сапраўды так, замест таго, каб загадзя выбіраць вобласці цікавасці, гэты падыход дазваляе нам ацаніць аб'ём шэрага і белага рэчыва па ўсім мозгу непрадузятым чынам. Ён прадугледжвае сегментацыю мозгу на шэрае рэчыва, белае рэчыва і спіннамазгавую вадкасць. Мы выкарыстоўваем устаноўленыя метады, метады EBM, каб колькасна ацаніць змены ў мозгу з цягам часу.

А на воксельным узроўні гэта дазваляе нам бачыць карты лакальнага пашырэння або скарачэння тканін паміж першым і другім момантамі часу, каб вызначыць, калі адбываецца нейрадэгенерацыя і з якой хуткасцю. Затым мы праверылі ўзровень проэнкефаліну ў спіннамазгавой вадкасці на першым узроўні часу, а таксама ў плазме і спіннамазгавой вадкасці NfL. І мы выкарыстоўваем іх для [00:10:00] прагназавання таго, дзе былі выяўлены прасторавы малюнак і велічыня атрафіі. І мы скарэктавалі гэта з улікам узросту, полу, інтэрвалу часу паміж сканаваннямі, а таксама цяжару захворвання. Такім чынам, ключавы момант заключаецца ў тым, што мы не проста пытаемся, чым гэтыя групы адрозніваюцца ў адзін момант часу, але мы пытаемся, дзе ў мозгу адбываецца страта гэтага фактару з цягам часу, і ці могуць базавыя біямаркеры біявадкасці прадказаць прасторавы малюнак і велічыню гэтай страты.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: І ў той дзень гэтыя біямаркеры паказалі заканамернасць, анатомічны характар ​​атрафіі на МРТ.

Доктар Мена Фараг: Такім чынам, галоўнай высновай даследавання было тое, што базавая канцэнтрацыя PENK у спіннамазгавой вадкасці (СМР) моцна прадказвала атрафію мозгу з пераважна стрыятальным або прасторавым характарам, у прыватнасці, больш нізкія базавыя канцэнтрацыі PENK у СМР былі звязаны з большай падоўжнай стратай шэрага рэчыва ў цэнтральнай частцы мозгу і путамене з абодвух бакоў з адпаведнымі зменамі белага рэчыва ў прылеглым перыстрыятальным белым рэчыве. І гэтыя сувязі застаюцца [00:11:00] значнымі нават пасля карэкціроўкі цяжару захворвання, што сведчыць аб тым, што PENK дае інфармацыю, якая выходзіць за рамкі толькі ўзросту і даўжыні CAG-паўтораў, якія, як мы ведаем, з'яўляюцца вядомымі фактарамі прагрэсавання хваробы Хантынгтана.

У той час як NfL прадэманстраваў зусім іншы прасторавы профіль, больш высокія канцэнтрацыі святла нейрафіламентаў у спіннамазгавой вадкасці (СМР) лепш прадказвалі глабальныя і распаўсюджаныя змены ў белым рэчыве, а таксама дыфузныя змены ў шэрым рэчыве кары. Гэтае адрозненне добра адпавядае таму, што мы насамрэч ведаем пра NfL у біялагічным плане.

Бо мы ведаем, што NfL — гэта структурны аксональны бялок, які адлюстроўвае глабальнае нейрааксональнае пашкоджанне, у той час як PENK, відаць, больш звязаны з паталогіяй паласатага цела. Цікава таксама тое, што мы назіралі некаторыя адрозненні паміж NfL у спіннамазгавой вадкасці і плазме на гэтых вельмі ранніх стадыях захворвання.

І што тычыцца аналізу, то базавы ўзровень плазматычнага NfL быў звязаны з больш абмежаваным характарам [00:12:00] страты аб'ёму мозгу, абмежаваным невялікімі кластарамі ў коркавым шэрым рэчыве, што даволі моцна адрознівалася ад таго, што мы назіраем пры NfL у спіннамазгавой вадкасці. І гэта адкрыццё, у прыватнасці, сведчыць аб тым, што, магчыма, плазматычны NfL можа быць менш адчувальным, чым NfL у спіннамазгавой вадкасці, для выяўлення ранніх нейрадэгенератыўных змен у гэтых кагортах з далёкім ад пачатку захворвання.

Але тым не менш, у НФЛ гэты кантэкст усё яшчэ мае значэнне і прымяненне.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Такім чынам, як вы згадалі, гэта біямаркеры крыху розных працэсаў. Адзін больш спецыфічны, другі звязаны з нейронамі паласатага цела. Адзін больш агульны, ён проста адлюстроўвае нейрааксональнае пашкоджанне. Як гэтыя біямаркеры могуць інфармаваць пра патафізіялогію і нейрадэгенератыўны працэс на самых ранніх стадыях?

Ці варта нам прытрымлівацца проэнкефаліна? Ці варта нам выкарыстоўваць абодва прэпараты, каб атрымаць дадатковую інфармацыю? Што вы думаеце пра выкарыстанне абодвух біямаркераў?

Доктар Мена Фараг: Гэта сапраўды добрае пытанне, і замест таго, каб [00:13:00] думаць пра іх як пра канкуруючыя біямаркеры, я думаю, што яны адлюстроўваюць дапаўняльныя працэсы захворвання. Такім чынам, PENK хутчэй з'яўляецца сігналам спецыфічнай нейрональнай уразлівасці стрыятума, у той час як NfL адлюстроўвае больш шырокае пашкоджанне нейронаў аксонамі. І калі мы сапраўды разглядалі стадыю захворвання, я казаў пра тое, што кагорта пераважна мела стадыю нуль-адзін да таго, як клінічная навука паказала крывыя прыёмна-аператарных аналізаў, каб ацаніць адчувальнасць PENK. Мы параўноўвалі, каб убачыць, ці падобны PENK у спіннамазгавой вадкасці ці можа пераўзысці NfL у адрозненні гэтых двух стадый. І мы ведаем, што першая стадыя вызначаецца прыкметамі паражэння стрыятума або каардынуючай страты атрафіі путамена.

Такім чынам, было б біялагічна інтуітыўна, што біямаркеры, узбагачаныя стрыятом, такія як PENK, маглі б адпавядаць гэтаму пераходу. І калі мы гэта зрабілі, мы паказалі, што PENK насамрэч пераўзыходзіў NfL у адрозненні першай стадыі ад нулявой. І [00:14:00] пры аб'яднанні абодвух біямаркераў назіралася невялікае паляпшэнне гэтай дыскрымінацыйнай прадукцыйнасці.

Такім чынам, я лічу, што ў цэлым адна з найважнейшых праблем пры хваробе ХБ заключаецца ў тым, што да з'яўлення рухальных сімптомаў можа адбыцца значная, у значнай ступені незваротная страта нейронаў паласатага цела, і калі няма клінічных прыкмет, напрыклад, на нулявой і першай стадыях, маніторынг захворвання сапраўды залежыць ад аб'ектыўных біялагічных паказчыкаў.

І вось тут і прыходзяць на дапамогу біялагічныя і нейравізуалізацыйныя біямаркеры. PENK мае асаблівы патэнцыял у гэтым кантэксце, бо ён адлюстроўвае цэласнасць нейронаў паласатага цела і можа прадказваць будучую атрафію паласатага цела. Я думаю, што як NfL, так і PENK у спалучэнні даюць больш нюансаваную і біялагічна абгрунтаваную карціну гэтых ранніх змяненняў пры хваробе Хантынгтана, якія паўтараюцца.

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Гэта падводзіць мяне да наступнага пытання. Наколькі я разумею, біялагічная сістэма стадыравання хваробы Хантынгтана, гэта значыць прагрэсаванне паміж нулявой стадыяй, калі няма выяўленай [00:15:00] нейрадэгенерацыі, і першай стадыяй, калі няма сімптомаў, але ёсць прыкметы нейрадэгенерацыі, звычайна дэманструецца пры дапамозе МРТ, і, наколькі я разумею, гэта не тое, якія біямаркеры ўключаны ў гэтую сістэму стадыравання. Што тычыцца будучых клінічных выпрабаванняў, як, на вашу думку, вынікі вашага даследавання і ў цэлым біямаркеры NfL і проэнкефаліна, а таксама іншыя патэнцыйныя вільготныя біямаркеры паўплываюць на дызайн клінічных выпрабаванняў? Як, на вашу думку, вашы вынікі будуць выкарыстоўвацца ў бліжэйшай будучыні?

Доктар Мена Фараг: Гэта сапраўды добрае пытанне. Зыходзячы з планавання будучых прафілактычных клінічных выпрабаванняў, і, як вы кажаце, цяперашнія крытэрыі HD ISS не ўключаюць вільготныя біямаркеры. Таму я думаю, што патэнцыйна ёсць патэнцыял пашырыць крытэрыі HD ISS для нулявой і першай стадый, каб яны маглі іх уключыць.

Такія вільготныя біямаркеры, як PENK і NfL, могуць быць карыснымі для далейшай стратыфікацыі і падпадзелу на нулявую стадыю [00:16:00]. А з пункту гледжання дызайну прафілактычнага даследавання, скарэкціраваныя нормы і

Больш папулятыўных дадзеных аб гэтых біямаркерах у межах нормы, мы маглі б патэнцыйна атрымаць узбагачэнне стадый, што магло б быць карысным для набору ўдзельнікаў у клінічныя выпрабаванні. 

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Выдатна. Так. І я думаю, што нядаўна навіны дайшлі да іх. СМІ, і я думаю, што хвароба Хантынгтана з пункту гледжання прафілактыкі і мадыфікацыі клінічных выпрабаванняў, верагодна, на некалькі крокаў апярэджвае некаторыя іншыя нейрадэгенератыўныя рухальныя засмучэнні з генетычнай тэрапіяй і іншымі паспяховымі даследаваннямі, якія былі апублікаваныя да гэтага часу. Маё пытанне: куды, на вашу думку, рухаецца будучыня клінічных выпрабаванняў хваробы Хантынгтана? І як вы бачыце свае вынікі, якія паўплываюць на гэта? І што, на вашу думку, будзе наступным важным момантам тэрапіі Хантынгтана?

Доктар Мена Фараг: Так, хвароба Хантынгтана — тэрапеўтычны ландшафт значна пашырыўся за апошнія пяць-дзесяць [00:17:00] гадоў. Шмат розных падыходаў. Такім чынам, акрамя зніжэння рызыкі Хантынгтана, існуюць мадулятары сплайсінгу. Ёсць генная тэрапія з выкарыстаннем вірусных вектараў, і ў апошні час саматычнае пашырэнне паўтораў CAG таксама з'яўляецца мішэнню для тэрапіі, якая мадыфікуе захворванне, і знаходзіцца ў распрацоўцы.

Я думаю, што, хоць бягучыя клінічныя выпрабаванні знаходзяцца на другой фазе, а некаторыя — на першай, мэтай і надзеяй з'яўляецца пашырэнне гэтых праграм да трэцяй фазы і далей. І, спадзяюся, выпрабаванні, якія змяняюць захворванне, атрымаюць адабрэнне рэгулюючых органаў. Але я думаю, што, нягледзячы на ​​ўсё гэта, вельмі важна думаць пра будучыя прафілактычныя выпрабаванні.

Калі мы хочам паспрабаваць прадухіліць або запаволіць прагрэсаванне захворвання ў клінічна бессімптомных і бессімптомных кагортах, такіх як асобы з нулявой і першай стадыямі гепатыту ГБ-ІСС, і я думаю, што для гэтага трэба зрабіць крокі. Вось тут вельмі важныя падоўжныя [00:18:00] назіральныя даследаванні, такія як даследаванне маладых дарослых, таму што для таго, каб рэгулюючыя органы сапраўды прымалі біямаркеры ў якасці сурагатных канчатковых кропак, яны павінны лічыцца дастаткова верагоднымі для прагназавання клінічнай карысці.

І. Калі ўспомніць гэтыя вельмі раннія стадыі, традыцыйныя клінічныя канчатковыя кропкі, такія як кампазітны шкала UHDRS, якая ў цяперашні час выкарыстоўваецца ў якасці канчатковай кропкі. У бягучых клінічных выпрабаваннях другой і трэцяй стадый гэтыя выпрабаванні не з'яўляюцца актуальнымі для нулявой і першай стадый, калі няма клінічных прыкмет.

І менавіта тут сапраўды важныя аб'ектыўныя біямаркеры, такія як біявадкасці, біямаркеры і нейравізуалізацыйныя маркеры. 

Доктар Эдуарда дэ Пабла-Фернандэс: Вялікі дзякуй. Я думаю, што гэта вельмі перспектыўная перспектыва для даследаванняў хваробы Хантынгтана ў бліжэйшыя гады. Вялікі дзякуй, Мена, за ваш час сёння. У мяне была Мена Фараг з Інстытута неўралогіі на плошчы Куін-сквер Універсітэта Лондана ў Цэнтры хваробы Хантынгтана.

Спадзяюся, падкаст вам спадабаецца, і я заклікаю ўсіх чытачоў [00:19:00] прачытаць поўны артыкул, апублікаваны ў часопісе Movement Disorders Journal. Пакуль што.

Доктар Мена Фараг: Дзякуй. [00:20:00]